目的：探讨2型糖尿病（T2DM）患者血清叶酸（FA）、同型半胱氨酸（Hcy）及5-甲基四氢叶酸（5-MTHF）的代谢特征及其在糖尿病并发症发生中的作用。方法：选取2024年1月–2025年6月收治的80例T2DM患者（观察组）和60例健康者（对照组），采用化学发光法检测血清叶酸、同型半胱氨酸及5-甲基四氢叶酸指标，分析其与血糖参数、病程及微血管并发症的关联性。结果：观察组血清FA（8.3±2.1 vs 13.5±3.0 ng/mL）和5-MTHF（4.7±1.2 vs 7.8±1.5 ng/mL）显著低于对照组（P<0.01），Hcy（18.6±4.3 vs 9.2±2.1 μmol/L）显著升高（P<0.01）。合并微血管病变者Hcy水平达22.4±5.1 μmol/L。FA、5-MTHF与HbA1c呈负相关（r=-0.62, -0.58），Hcy与HbA1c呈正相关（r=0.67）。结论：T2DM患者普遍存在叶酸代谢障碍，FA/5-MTHF降低和Hcy升高的代谢轴紊乱，Hcy/5-MTHF比值与微血管病变严重程度显著正相关（r=0.71, P<0.001）。推荐将活性叶酸（5-MTHF）补充纳入糖尿病综合管理，尤其针对病程>5年、HbA1c>8%的高危人群，需开展前瞻性研究验证叶酸代谢干预对并发症的预防效应。