目的：探讨透明质酸负载的β-蜕皮甾酮（β-Ec）缓释注射水凝胶通过激活自噬作用改善膝关节骨关节炎（OA）软骨损伤的效果及其作用机制。方法：通过前交叉韧带切断术（ACLT）构建膝关节OA大鼠模型，并使用20 ng/mL的肿瘤坏死因子α（TNF-α）处理初级培养的软骨细胞，以模拟炎症环境下的软骨细胞损伤模型。实验大鼠分为假手术组、OA模型组、HA-Gel治疗组和HA-β-Ec-Gel治疗组。使用透明质酸-聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）为基础的水凝胶系统，进行HA-Gel或HA-β-Ec-Gel治疗。通过显微CT技术测定膝关节的三维结构，包括骨小梁体积分数（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th.）及骨小梁数量（Tb.N.）。同时，采用苏木精-伊红（H&E）和番红O（S-O）染色观察软骨组织的病理变化，并通过Mankin评分和OARSI评分评估软骨损伤程度。此外，利用免疫组织化学和Western blot检测自噬相关蛋白（Beclin1、LC3）以及AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果：HA-β-Ec-Gel组相较于HA-Gel组，能够更加显著地改善OA大鼠的软骨组织损伤。显微CT结果显示，OA大鼠的骨小梁体积分数和厚度显著高于假手术组，而经HA-Gel或HA-β-Ec-Gel治疗后，骨小梁体积分数和厚度显著降低，其中HA-β-Ec-Gel组的降低效果更为显著（p < 0.05）。此外，Mankin和OARSI评分表明，HA-β-Ec-Gel处理能够显著降低软骨损伤评分，改善关节软骨的结构完整性（p < 0.05）。免疫组织化学和Western blot结果显示，HA-β-Ec-Gel能够上调自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达，并抑制LOXL3、Rheb及AKT/mTOR信号通路的活性。相较于HA-Gel，HA-β-Ec-Gel在提升自噬水平、抑制凋亡及减轻炎症损伤方面表现出更强的效果。敲低LOXL3或Rheb基因后，软骨细胞的自噬水平显著增加，且对TNF-α诱导的损伤不再敏感。结论：透明质酸负载的β-Ec缓释水凝胶通过激活自噬途径，改善OA软骨损伤，抑制凋亡及炎症反应，提示其具有治疗OA的潜力，并为开发新的OA治疗策略提供了科学依据。