实验性自身免疫性肌炎（Experimental Autoimmune Myositis, EAM）是研究多发性肌炎的经典动物模型，其造模通常采用粗提肌球蛋白乳化完全弗氏佐剂（CFA）免疫小鼠的方案。然而，粗提肌球蛋白制备过程中的机械处理程度差异是否影响造模成功率，目前尚无系统研究。本研究旨在比较两种不同肌肉组织处理方式所得粗提物对EAM造模效果的影响，并探讨肌肉胞内成分（包括线粒体碎片等损伤相关分子模式，DAMPs）在诱导肌肉免疫炎症中的潜在作用。

实验动物：选用 SPF 级 BALB/c 雌性小鼠，随机分为 2 组，每组 5 只，最终取材 3 只 / 组；

免疫原制备：取兔股四头肌为实验材料，实验组采用匀浆机匀浆法提取粗蛋白，对照组仅采用传统文献剪碎肌肉浸泡缓冲液法提取粗蛋白，均通过 Bradford 法检测蛋白浓度；

EAM 造模：两组均将粗提蛋白与等体积弗氏完全佐剂（CFA）充分乳化，以每次 1mg 粗蛋白的剂量，采用四次免疫方案，背部多点联合尾根注射，免疫间隔 1 周，造模第 10 天处死小鼠并取材股四头肌组织。

检测方法：对股四头肌组织进行 HE 染色，按照 EAM 领域文献金标准进行炎症浸润及肌纤维损伤半定量评分，观察并量化分析两组小鼠肌组织的病理改变情况。

蛋白浓度检测结果：匀浆法提取的粗蛋白浓度约为 5.5mg/ml，仅剪碎法提取的粗蛋白浓度约为 7.2mg/ml，对照组蛋白浓度高于实验组；

HE 染色结果：实验组股四头肌组织周围可见明显淋巴细胞炎症浸润，肌纤维存在轻度损伤，可诱导基础 EAM 炎症反应；对照组股四头肌组织炎症细胞浸润稀少，肌纤维结构完整，接近阴性，造模基本失败。

BALB/c 小鼠 EAM 模型的成功构建并非依赖粗肌球蛋白的绝对浓度，核心在于其免疫原制备中机械破碎所释放的肌肉胞内成分。线粒体碎片等 DAMPs 可作为内源性免疫佐剂，与肌球蛋白抗原协同驱动肌肉自身免疫炎症反应；仅靠剪碎法提取的粗肌球蛋白，因缺乏胞内辅助成分无法有效诱导炎症，最终导致造模失败。本研究证实机械匀浆是 EAM 造模中粗蛋白提取的必要步骤，为后续造模方法的标准化优化提供了实验依据，也为深入探究肌炎发病机制中 DAMPs 的作用奠定了初步基础。